色谱Tips|反相色谱柱使用和维护说明 

色谱柱既是样品组分分离的场所,又是仪器的一种耗材,价格昂贵,正确的使用,可在分析数万个以上的样品后仍能保持良好的性能,而不正确的操作,则可能在一次使用中即告报废。因此,对其正确的使用及维护不仅可以保证检测的准确性,而且还可以最大限度的延长使用寿命,降低检测成本。下文是赛默飞世尔反向色谱柱的使用和维护说明，供大家参考。

    适用键合相    

      

        反相色谱柱键合相包括：C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano1等。

       柱体积       

      色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算：

      V为色谱柱柱体积（mL），r为色谱柱内径（cm），L为色谱柱长度（cm）。

柱效测试与保存

        反相色谱柱出厂时都经过柱效测试，所用化合物为茶碱、邻-硝基苯胺、苯甲酸甲酯、苯乙醚和二甲苯，如有不同，以柱效报告为准。

在条件允许情况下，请对新色谱柱进行柱效测试。

        反相色谱柱出厂时均保存在乙腈-水溶液中。

        温度        

        所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于60℃。

        样品        

        最好将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱，则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。

样品溶液不应含有任何颗粒物，最好使用0.5μm或更小粒径的滤膜过滤。同时建议在色谱系统中使用在线过滤器。

        样品溶液如果使用强溶剂（例如，流动相为水，样品溶剂为甲醇），为达到较好峰形，需要降低进样量（以250x4.6mm规格为例，小于10μL）。

      流动相     

        所有流动相，特别是含有缓冲盐的流动相，最好当日实验当日配制；如果使用了前日配制的流动相，请确保流动相pH值没有变化，并确保流动相没有长菌。

        流动相的pH值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱上都仅使用pH范围为2~8的流动相（Hypercarb可以使用pH为 1~14 的流动相）；如果需要使用pH更高（2~10）的流动相，请选用Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18等色谱柱，并请尽量避免使用无机缓冲盐。

请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水（>95%）作为流动相，此类流动相仅适用于中等疏水的键合相，例如Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ等色谱柱。

        所有流动相都需使用2μm滤膜过滤。

  色谱柱安装  

        请小心操作色谱柱。

        不要摔、碰色谱柱，这样会损坏色谱柱床，使色谱柱性能下降。

        使用合适的连接管路和接头，确保色谱柱连接处死体积降到最低（使用不锈钢接头时需要尤其注意）。我们建议使用viper接头，此接头与Thermo色谱柱以及其他品牌色谱柱均完美匹配。

  色谱柱平衡  

        在进行分析之前，请使用至少20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱，以使色谱柱达到平衡。

  色谱柱保护  

        对于“脏”的样品以及组分未知的样品，请尽量使用在线滤器或保护柱，如果可能，使用SPE小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

  色谱柱清洗  

        常规清洗：

        在储存色谱柱之前，请使用至少20倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱（去除缓冲盐），再用更强的溶剂冲洗色谱柱（去除强保留成分，反相色谱通常使用甲醇或乙腈），然后使用合适的溶剂储存色谱柱。

        清洗强保留污染物：

        使用如下试剂依次清洗色谱柱

        20倍柱体积不带缓冲盐的流动相；

        20倍柱体积甲醇或乙腈；

        20倍柱体积异丙醇；

        20倍柱体积正己烷或氯仿；

        20倍柱体积异丙醇；

        20倍柱体积甲醇或乙腈。

  色谱柱保存  

        反相色谱柱，保存溶剂通常是含至少30% 有机相的水溶液，也可在常规清洗后 直接保存在有机相中。 

        如果需要长时间储藏，则需要使用较高比例的有机相（有机相比例至少大于50%，但不建议使用纯有机相）。

        注意：如果违反上述规程，可能使色谱柱失去保修。

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